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農作物種子檢驗規程---真實性和品種純度鑒定
(發布日期：2004-11-23 16:40:54) 瀏覽人數：
    1  主題內容與適用范圍
    本標準規定了測定種子真實性和品種純度的方法。
    本標準適用于農作物種子質量的檢測。

    2  引用標準
    GB／T 3543. 2  農作物種子檢驗規程  扦樣
    GB／T 3543．4  農作物種子檢驗規程  發芽試驗 

    3  術語 
    3. 1  種子真實性  genuineness of seed
    供檢品種與文件記錄(如標簽等)是否相符。 
    3．2  品種純度  varietal purity
    品種在特征特性方面典型一致的程度，用本品種的種子數占供檢本作物樣品種子數的百分率表示。 
    3．3  變異株  off-type
    —個或多個性狀(特征特性)與原品種育成者所描述的性狀明顯不同的植株。 
    3．4  育種家種子  breeder seed
    育種家育成的遺傳性狀穩定的品種或親本種子的最初一批種子，用于進一步繁殖原種種子。 
    3．5  原種  basic seed
    用育種家種子繁殖的第一代至第三代，或按原種生產技術規程生產的達到原種質量標準的種子，用于進—步繁殖良種種子。
    3．6  良種  certified seed
    用常規種原種繁殖的第—代至第三代和雜交種達到良種質景標準的種子，用于大田生產。 

    4  試劑
    苯酚，愈創木酚、過氧化氫、氫氧化鉀、氫氧化鈉，氯化氫。

    5   儀器和設備
    其儀器設備也隨方法的差異而不同。
    a.在實驗室中測定
    配備適宜的儀器(如體視顯微鏡、擴大鏡、解剖鏡)與試劑，以供種子形態、生理及細胞學的檢查、化學測定及種子發芽之用。
    b.  在溫室和培養室中測定
    配備能調節環境條件的設備(如生長箱)，以利誘導鑒別性狀的發育。
    c.  在田間小區里鑒定
    需具有能使鑒定性狀正常發育的氣候、土壤及栽培條件，并對防治病蟲害有相對的保護措施。 

    6  測定程序 
6．1  送驗樣品的重量
    品種純度測定的送驗樣品的最小重量應符合表1的規定。

    表1  品種純度測定的送驗樣品重量    g

    種    類                      限于實驗室測定    田間小區及實驗室測定

豌豆屬、蠶豆屬、玉米屬、菜豆屬、玉米屬、
大豆屬及種于大小類似的其他屬                     1000                 2000

水稻屬、大麥屬、燕麥屬、小麥屬、黑麥屬及種
子大小類似的其他屬                                500                 1000                          

甜菜屬及種子大小類似的其他屬                      250                  500

所有其他屬                                        l00                  250 

    6．2  種子鑒定 
    6．2. 1形態鑒定法
    隨機從送驗樣品中數取400粒種子，鑒定時須設重復，每個重復不超過100粒種子。
    根據種子的形態特征，必要時可借助擴大鏡等進行逐粒觀察，必須備有標準樣品或鑒定圖片和有關資料。
    水稻種子根據谷粒形狀、長寬比、大小、稃殼和稃尖色、稃毛長短、稀密、柱頭夾持率等；大麥種子根據籽粒形狀、外稃基部皺褶、籽粒顏色、腹溝基刺、腹溝展開程度、外稃側背脈紋齒狀物及脈色、外稃基部稃殼皺褶凹陷。小穗軸茸毛多少、鱗被(漿片)形狀及茸毛稀密等；大豆種子可根據種子大小、形狀、顏色、光澤、光滑度，蠟粉多少及種臍形狀顏色等，蔥類可根據種子大小、形狀、顏色、表面構造及臍部特征等。 
    6．2．2快速測定法
    隨機從送驗樣品中數取400粒種子，鑒定時須設重復，每個重復不超過100粒種子。
    a.  苯酚染色法
    小麥、大麥、燕麥；將種子浸入清水中經18～24 h，用濾紙吸干表面水分，放入墊有已經1％苯酚溶液濕潤濾紙的培養皿內(腹溝朝下)。在室溫下，小麥保持4h，燕麥2h，大麥24h后即可鑒定染色深淺。小麥觀察穎果染色情況，大麥、燕麥評價種子內外稃染色情況。通常顏色分為五級即淺色、淡褐色、褐色、深褐色和黑色。將與基本顏色不同的種子取出作為異品種。
    水稻：將種子浸入清水中經6 h，倒去清水，注入l％(m／v)苯酚溶液，室溫下浸12 h取出用清水洗滌，放在濾紙上經24 h，觀察谷粒或米粒染色程度。谷粒染色分為不染色、淡茶褐色、茶褐色、黑褐色和黑色五級，米粒染色分不染色、淡茶褐色，褐色或紫色三級。
    b.  大豆種皮愈創木酚染色法
    將每粒大豆種子的種皮剝下，分別放入小試管內，然后注入1 mL 蒸餾水，在30℃下浸提1h，再在每支試管中加入10滴0.5%愈創木酚溶液，10min后，每支試管加入1滴0.1％過氧化氫溶液。1 min后，計數試管內種皮浸出液呈現紅棕色的種子數與浸出液呈無色的種子數。
    c.  高梁種子氫氧化鉀-漂白粉測定法
    配制l：5(m／V)氫氧化鉀和新鮮普通漂白粉(5.25％漂白粉)的混合液[即1g氫氧化鉀(KOH)加入5.0mL漂白液)，通常準備100mL溶液，貯于冰箱中備用。將種子放入培養皿內，加入氫氧化鉀—漂白液(測定前應置于室溫一段時間)以淹沒種子為度。棕色種皮浸泡10 min。浸泡中定時輕輕搖晃使溶液與種子良好接觸，然后把種子倒在紗網上，用自來水慢慢沖洗，沖洗后把種子放在紙上讓其氣干，待種子干燥后，記錄黑色種子數與淺色種子數。
    d．  燕麥種子熒光測定法
    應用波長360A紫外光照射，在暗室內鑒定。將種子排列在黑紙上，置于距紫外光下l0～15cm處，照射數秒至數分鐘后即可根據內外稃有無熒光發出進行鑒定。
    c．  燕麥種子氯化氫測定法
    將燕麥種子放入早已配好的氯化氧溶液[1份38％(V／V)鹽酸(HCl)和4份水]的玻璃器皿中浸泡 6 h，然后取出放在濾紙上讓其氣干1 h。根據棕褐色(熒光種子)或黃色(非熒光種子)來鑒別種子。
    f．  小麥種子的氫氧化鈉測定法
    當小麥種子紅白皮不易區分(尤其是經殺菌劑處理的種子)時，可用氫氧化鈉測定法加以區別。數取 400粒或更多的種子。先用95％(V／V)甲醇浸泡15min，然后讓種子干燥30min，在室溫下將種子浸泡在5M／L NaOH溶液中5min，然后將種子移至培養皿內，不可加蓋，讓其在室溫下干燥，根據種子淺色和深色加以計數。 
    6．2．3  小麥、大麥醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺電泳法見附錄A(參考件)。 
    6．3  幼苗鑒別
    隨機從送驗樣品中數取400粒種子，鑒定時須設重復，每重復為100粒種子。在培養室或溫室中可以用100，二次重復。
    幼苗鑒定可以通過兩個主要途徑：一種途徑是提供給植株以加速發育的條件(類似于田間小區鑒定，只是所需時間較短)，當幼苗達到適宜評價的發育階段時，對全部或部分幼苗進行鑒定；另一種途徑是讓植株生長在特殊的逆境條件下，測定不同品種對逆境的不同反應來鑒別不同品種。
    禾谷類：禾谷類作物的芽鞘、中胚軸有紫色與綠色兩大類，它們是受遺傳基因控制的。將種子播在砂中(玉米、高粱種子間隔1.0 cm×4.5 cm，燕麥、小麥種子間隔2.0 cm× 4.0cm，播種深度1.0cm)，在 25℃恒溫下培養，24 h光照。玉米、高粱每天加水，小麥、燕麥每隔4 d施加缺磷的Hoagland l號培養液。在幼苗發育到適宜階段時，高粱、玉米14d，小麥7d，燕麥10～14d，鑒定芽鞘的顏色。
    注；缺磷的Hoagland 1號培養液配方：在1 L蒸餾水中加入4mLIm/L硝酸鈣溶液[Ca(NO3)2]、2 mLl M／L硫酸
    鎂溶液(MgSO4)和6 mLIM／L硝酸鉀溶液(KN03)。
    大豆：把種子播于砂中(種子間隔 2.5 cm×2.5 cm，播種深度2.5 cm)，在25℃下培養，24 h光照，每隔4 d施加 Hoaglandl 號培養液，至幼苗各種特征表現明顯時，根據幼苗下胚軸顏色(生長 10～14d)，茸毛顏色(21 d)、茸毛在胚軸上著生的角度(2ld)、小葉形狀(2ld)等進行鑒定。
    注：Hoagland號培養液配方：在1L蒸餾水中加入l mL IM／L磷酸二氧鉀溶液(KH2PO4)，5 mL1 M／L。硝酸鉀溶
    (KNO3)、5mLlM/L硝酸鈣溶液(Ca(NO3)2)和2mLl M／L硫酸鎂溶液(MgS04)。
    萵苣：將萵苣種子播在砂中(種子間隔1.0cm×4.0 cm，播種深度1 cm)，在25℃恒溫下培養，每隔 4d施加Hoaglandl號培養液，3周后(長有3～4片葉)根據下胚軸顏色、葉色、葉片卷曲程度和子葉等形狀進行鑒別。
    甜菜：有些栽培品種可根據幼苗顏色(白色、黃色、暗紅色或紅色)來區別。將種球播在培養皿濕砂上。置于溫室的柔和日光下，經7d后，檢查幼苗下胚軸的顏色。根據白色與暗紅色幼苗的比例，可在一定程度上表明糖用甜菜及白色飼料甜菜栽培品種的真實性。
    6．4  田間小區種植鑒定①
    田間小區種植是鑒定品種真實性和測定品種純度的最為可靠、準確的方法。為了鑒定品種真實性，
    應在鑒定的各個階段與標準樣品進行比較。對照的標準樣品為栽培品種提供全面的、系統的品種特征特性的現實描述，標準樣品應代表品種原有的特征特性，最好足育種家種子。標準樣品的數量應足夠多，以便能持續使用多年，并在低溫干燥條件下貯藏，更換時最好從育種家處獲取。
    注：①本節等效采用國際貿易中種子流通的OECD品種認證方案《小區鑒定方法指南》(OECDl982)。
    為使品種特征特性充分表現，試驗的設汁和布局上要選擇氣候環境條件適宜的、土壤均勻、肥力一致，前茬無同類作物和雜草的田塊，并有適宜的栽培管理措施。
    行間及株間應有足夠的距離，大株作物可適當增加行株距，必要時可用點播和點栽。
    為了測定品種純度百分率，必須與現行發布實施的國家標準種子質量標準相聯系起來。試驗設計的種植株數要根據國家標準種子質量標準的要求而定，一般來說，若標準為(N一1)×(100％／N，種植株數 4N即可獲得滿意結果，如標準規定純度為98％，即N為50，種植200株即可達到要求。
    檢驗員應擁有豐富的經驗，熟悉被檢品種的特征特性，能正確判別植株是屬于本品種還是變異株。變異株應是遺傳變異，而不是受環境影響所引起的變異。
    許多種在幼苗期就有可能鑒別出品種真實性和純度，但成熟期(常規種)、花期(雜交種)和食用器官成熟期(蔬菜種)是品種特征特性表現時期，必須進行鑒定。
    良種品種純度是否達到國家標準種子質量標準、合同和標簽的要求，可利用表2進行判別。

                             表2  品種純度的容許差距
                             (5％顯著水平的一尾測定)
    標準規定值                           樣本株數、苗數或種子粒數
  50%以上   50％以下      50      75     100    150    200    400    600    l000
    100        0          O       O      O      O      O      O      O      0
    99         1          2.3     1.9    1.6    1.3    1.2    0.8    0.7    0.5
    98         2          3.3     2.7    2.3    1.9    1.2    1.2    0.9    0.7
    97         3          4.O     3.3    2.8    2.3    2.0    l.4    l.2    0.9
    96         4          4.6     l.7    3.2    2.6    2.3    l.6    1.3    1.O
    95         5          5.1     4.2    3.6    2.9    2.5    1.8    1.5    1.1
    94         6          5.5     4.5    3.9    3.2    2.8    2.0    1.6    l.2
    93         7          6.0     4.9    4.2    3.4    3.0    2.1    1.7    1.3
    92         8          6.3     5.2    4.5    3.7    2.2    2.2    1.8    1.4
    91         9          6.7     5.5    4.7    3.9    3.3    2.4    1.9    1.5
    90         10         7.O     5.7    5.0    4.0    3.5    2.5    2.O    1.6
    89         ll         7.3     6.0    5.2    4.2    3.7    2.6    2.l    l.6
    88         12         7.6     6.2    5.4    4.4    3.8    2.7    2.2    1.7
    87         13         7.9     6.4    5.5    4.5    3.9    2.8    2.2    1.8
    86         14         8.1     6.6    5.7    4.7    4.O    2.9    2.3    1.8
    85         15         8.3     6.8    5.9    4.8    4.2    3.0    2.4    1.9
    84         16         8.6     7.0    6.l    4.9    4.3    3.0    2.5    l.9
    83         17         8.8     7.2    6.2    5.1    4.4    3.1    2.5    2.0
    82         18         9.0     7.3    6.3    5.2    4.5    3.2    2.6    2.0
    8l         19         9.2     7.5    6.5    5.3    4.6    3.2    2.6    2.1
    80         20         9.3     7.6    6.6    5.4    4.7    3.3    2.7    2.1
    79         21         9.5     7.8    6.7    5.5    4.8    3.4    2.7    2.1
    78         22         9.7     7.9    6.8    5.6    4.8    3.4    2.8    2.2
    77         23         9.8     8.0    7.0    5.7    4.9    3.5    2.8    2.2
    76         24         10.O    8.1    7.1    5.8    5.O    3.5    2.9    2.2
    75         25         10.1    8.3    7.1    5.8    5.1    3.6    2.9    2.3
    74         26         l0.2    8.4    7.2    5.9    5.l    3.6    3.0    2.3
                         
                                  續表2
      標準規定值                     樣本株數、苗數或種子粒數
  50%以上  50％以下       50      75    100    150    200    400    600   l000
    73       27          10.4    8.5    7.3    6.0    5.2    3.7    3.0    2.3
    72       28          10.5    8.6    7.4    6.1    5.2    3.7    3.0    2.3
    71       29          10.6    8.7    7.5    6.1    5.3    3.8    3.1    2.4
    70       30          10.7    8.7    7.6    6.2    5.4    3.8    3.1    2.4
    69       31          10.8    8.8    7.6    6.2    5.4    3.8    3.1    2.4
    68       32          10.9    8.9    7.7    6.3    5.5    3.8    3.2    2.4
    67       33          11.0    9.0    7.8    6.3    5.5    3.9    3.2    2.5
    66       34          11.1    9.0    7.8    6.4    5.5    3.9    3.2    2.5
    65       35          11.1    9.1    7.9    6.4    5.6    3.9    3.2    2.5
    64       36          11.2    9.1    7.9    6.5    5.6    4.0    3.2    2.5
    63       37          11.3    9.2    8.0    6.5    5.6    4.0    3.3    2.5
    62       38          11.3    9.2    8.0    6.5    5.7    4.0    3.3    2.5
    61       39          11.4    9.3    8.1    6.6    5.7    4.0    3.3    2.5
    60       40          11.4    9.3    8.1    6.6    5.7    4.0    3.3    2.6
    59       41          11.5    9.4    8.1    6.6    5.7    4.1    3.3    2.6
    58       42          11.5    9.4    8.2    6.7    5.8    4.1    3.3    2.6
    57       43          11.6    9.4    8.2    6.7    5.8    4.1    3.3    2.6
    56       44          11.6    9.5    8.2    6.7    5.8    4.1    3.4    2.6
    55       45          11.6    9.5    8.2    6.7    5.8    4.1    3.4    2.6
    54       46          11.6    9.5    8.2    6.7    5.8    4.1    3.4    2.6
    53       47          11.6    9.5    8.2    6.7    5.8    4.1    3.4    2.6
    52       48          11.7    9.5    8.3    6.7    5.8    4.1    3.4    2.6
    51       49          11.7    9.5    8.3    6.7    5.8    4.1    3.4    2.6
    50                   11.7    9.5    8.3    6.7    5.8    4.1    3.4    2.6

    國家標準種子質量標準規定純度要求很高的種子，如育種家種子、原種，是否符合要求，可利用淘汰值。淘汰值是在考慮種子生產者利益和有較少可能判定失誤的基礎上，把在一個樣本內觀察到的變異株數與質量標準比較，作出接受符合要求的種子批或淘汰該種子批，其可靠程度與樣本大小密切相關(見表3)。
         表3  不同樣本大小符合標準99.9％接收含有變異株種子批的可靠程度
                                                    
樣本大小（株數）  淘汰值            接受種子批的可靠程度，%
                           1.5／1000①   2／1000①       3／1000①

    1000            4          93             85              65
    4000            9          85             59              16
    8000           14          68             27               1
   12000           19          56             13              0.1
   注：①是指每l000株中所實測到的變異株。
    不同規定標準與不同樣本大小下的淘汰值見表4，如果變異株大于或等于規定的淘汰值，就應淘汰該種子批。             

    表4  不同規定標準與不同樣本大小的淘汰值   （表中數字6、5、7、4、4有下標線）
    規定標準    不同樣本(株數)大小的淘汰值
       %          4000    2000    1400    1000    400    300    200
    99.9          9        6        5       4      -      -      -
    99.7         19        11       9       7      4      -      -
    99.0         52        29       21      16     9      7      6
    注：下方有“一”的數字或“一”均表示樣本的數目太少。 

    7  結果計算和表示
    7．1  種子和幼苗
    用種子或幼苗鑒定時，用本品種純度百分率表示。
    品種純度(％)＝{供檢種子粒數（幼苗數）－異品種種子粒數（幼苗數）}/供檢種子粒數（幼苗數）×100 
    7．2  田間小區鑒定
    將所鑒定的本品種、異品種、異作物和雜草等均以所鑒定植株的百分率表示。

    8  結果報告
    在實驗室、培養室所測定的結果須填報種子數、幼苗數或植株數。
    田間小區種植鑒定結果除品種純度外，可能時還填報所發現的異作物、雜草和其他栽培品種的百分率。

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